在生物學和醫(yī)學研究中，原位雜交（in situ hybridization）是一種常用的技術，用于檢測DNA或者RNA作為探針與其互補的另一條鏈在細菌或其他真核細胞中的位置。

什么是原位雜交？

原位雜交（in situ hybridization）是指將特定標記的已知核酸序列作為探針，與細胞或組織切片中核酸進行雜交，從而對特定核酸序列進行精確定量定位的過程。

原位雜交可以在細胞標本或組織標本上進行。

在原位雜交實驗中，探針核酸如若與細胞或組織切片中核酸進行結合，需要精準的控制溫度的變化。

原位雜交的步驟

1、制備探針：原位雜交的第一步是制備探針。探針是一段DNA序列，可以與目標DNA序列互補配對；

2、制備樣品：樣品可以是細胞、組織或染色體；

3、雜交：探針與樣品中的目標DNA序列互補配對。雜交可以在液相中進行，也可以在固相中進行。液相雜交需要在高溫下進行，以便探針可以與目標DNA序列雜交。固相雜交需要在低溫下進行，以便探針可以與目標DNA序列雜交；

4、洗滌：需要將未雜交的探針從樣品中洗掉，以便檢測；

5、檢測：需要檢測探針是否與目標DNA序列雜交。

原位雜交的應用

1、細胞特異性mRNA轉錄的定位，可用于基因圖譜，基因表達和基因組進化的研究；

2、感染組織中病毒DNA/RNA的檢測和定位，如EB病毒mRNA、人類乳頭狀瘤病毒和巨細胞病毒DNA的檢測；

3、癌基因、抑癌基因及各種功能基因在轉錄水平的表達及其變化的檢測；

4、基因在染色體上的定位；

5、檢測染色體的變化，如染色體數量異常和染色體易位等；

6、分裂間期細胞遺傳學的研究，如遺傳病的產前診斷和某些遺傳病基因攜帶者的確定，某些腫瘤的診斷和生物學劑量測定等。

原位雜交過程中的關鍵

為了提高原位雜交的成功率可以采取以下措施：

1、 挑取優(yōu)勢菌落、選取新鮮的組織或者長勢好的細胞。實驗材料 的選用是直接影響原位雜交受否成功的關鍵；

2、 無菌操作。在生物安全柜或通風櫥中進行實驗操作，避免空氣中或其他雜菌的污染，提高原位雜交成功率；

3、 使用適當的儀器和設備進行精準控溫。在實驗過程中，需要37℃培養(yǎng)以及4℃長期貯放，也需要低豐度標記核酸的特異性擴增，直至獲得雜交反應的結果；

4、 抗生素的適配性。避免非特定標記核酸的雜交，減少原位雜交實驗中的誤差；

5、 硝酸纖維素膜使用質量好的。具有高蛋白結合能力和高機械強度、毛細管率與厚度一致、使用中不需要甲醇預濕等性能，獲得高特異性的抗體，增加原位雜交成功率。

柏恒科技PCR儀如何提高原位雜交的成功率？

1、 精準控溫。采用進口溫度循環(huán)器專用長壽命Peltier半導體模塊，控制溫度準確性小于0.1℃，精確把控核酸在原位雜交時的溫度條件；

2、 采用平板式模塊。為平面式鋁質模塊設計，可以平鋪放置平皿或載玻片，有利于溫度的均勻性；

3、 優(yōu)秀的溫控系統(tǒng)。基于優(yōu)秀的算法，準確計算出每刻的溫度的細微波動，然后進行修正，保持為所設溫度。

結論

原位雜交的成功與否盡管受很多因素的影響，但是我們可以通過專業(yè)知識以及操作來減少或避免，避免可以采取以下措施：

1、選取單一菌落；

2、配制試劑時，減少稱量或量取時的誤差；

3、優(yōu)化實驗條件；

4、使用合適的儀器來精準控溫；（如GE4T智能原位基因擴增儀）

5、減少與空氣接觸，避免污染。

這些都有助于提高實驗的成功率，減少了實驗的繁瑣操作，并且還為我們提供精確的科研數據。